产品货号:
WE0238
中文名称:
T4 DNA聚合酶
英文名称:
T4 DNA Polymerase
产品规格:
150U|750U
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是由大肠杆菌表达,表达基因的来源为T4嗜菌体。由于T4 DNA聚合酶同时具有5’→3’ DNA聚合酶活性和3’→5’ DNA外切酶活性,可以用于将5’端突出末端补平或3’端突出末端削平,也可用于通过置换反应进行标记DNA探针合成、通过引物伸长法解析mRNA转录的起始点、定点突变过程中第二链的合成以及不依赖于连接反应的PCR产物克隆等。本T4 DNA聚合酶的3’→5’ DNA外切酶活性比Klenow Fragment要高约100-1,000倍,且对于单链DNA要比双链DNA活性更高。本酶不含5’→3’DNA的外切核酸酶活性,于70℃加热10分钟可使其失活,金属离子螯合剂可以抑制其活性。
组分 | 150U | 750U |
T4 DNA Polymerase (3U/μL) | 50μL | 250μL |
10×T4 DNA Polymerase Reaction Buffer | 1mL | 4×1mL |
保存:-20℃
以热变性小牛胸腺DNA为模板/引物,在37℃、pH8.8条件下,30分钟内使10nmol全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
2U的本酶和1μg的Closed circular(RFI)pBR322 DNA在37℃下反应16小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
- 本酶的最适pH为8~9,在pH7.5及pH9.7时活性约为50%。
- 活性的表达需要Mg2+的存在。为了获得最大活性,还需要SH基的还原剂存在。
- 整个反应体系中的离子强度超过100mM时活性将被抑制。
- 本酶易受模板DNA高级结构的影响,T4 gene 32产物可以显著提高聚合酶的活性,而3’→5’的外切核酸酶活性则完全被抑制。
- DNA 5’或3’突出末端平滑化:
- 参考如下表格设置反应体系
成分 用量 digested DNA >0.1pmol 10×T4 DNA Polymerase Reaction Buffer 2μL dNTP Mixture (2.5mM each) 0.8μL T4 DNA Polymerase (3U/μl) 0.2μL ddH2O 至20μL - 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀后离心沉淀液体。
- 置于11℃反应20分钟,或室温(20~25℃)反应5分钟。
- 70℃保温10分钟终止反应。
- 参考如下表格设置反应体系
- 其他用途请自行参考T4 DNA Polymerase的相关文献资料进行。
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